Клонирование и анализ генов легких цепей иммуноглобулинов стерляди

            ÃÅÍÎÌÍÀß ÎÐÃÀÍÈÇÀÖÈß È ÝÊÑÏÐÅÑÑÈß ÃÅÍΠL-ÖÅÏÅÉ ÈÃ Ó ÍÈÇØÈÕ ÏÎÇÂÎÍÎ×ÍÛÕ

          Õðÿùåâûå ðûáû.

          Ãóìîðàëüíûé èììóííûé îòâåò â âèäå ñïåöèôè÷åñêèõ àíòèòåë îáíàðóæèâàåòñÿ òîëüêî ó ïîçâîíî÷íûõ. Íàèáîëåå ïðèìèòèâíûìè âèäàìè, ó êîòîðûõ îáíàðóæåíà ñïîñîáíîñòü ñèíòåçèðîâàòü ÈÃ, ÿâëÿþòñÿ õðÿùåâûå ðûáû. Ïðåäñòàâèòåëè òðåõ îñíîâíûõ òàêñîíîâ (àêóëû, ñêàòû è õèìåðû) ïðîäóöèðóþò àíòèòåëà â îòâåò íà ââåäåíèå øèðîêîãî ñïåêòðà àíòèãåíîâ. Îäíàêî, â îòëè÷èå îò ìëåêîïèòàþùèõ, ãåòåðîãåííîñòü ñûâîðîòî÷íûõ àíòèòåë ó õðÿùåâûõ ðûá âûðàæåíà î÷åíü ñëàáî. Êðîìå òîãî, ó íèõ íå îáíàðóæåíî ñîçðåâàíèå èììóííîãî îòâåòà - ïðè âòîðè÷íîì ââåäåíèè àíòèãåíà ñïåêòð àíòèòåë íå ìåíÿåòñÿ (Flajnik, 1996). Ðåçóëüòàòû èññëåäîâàíèé ïîñëåäíèõ ëåò ïðîäåìîíñòðèðîâàëè, ÷òî îðãàíèçàöèÿ ãåíîâ Èà ó õðÿùåâûõ ðûá òàêæå èìååò ÿðêî âûðàæåííûå îñîáåííîñòè.

          Ó õðÿùåâûõ ðûá îáíàðóæåíû ãåíû òðåõ òèïîâ L-öåïåé, ëîêàëèçóþùèåñÿ â ðàçíûõ ëîêóñàõ. Â êàæäîì ëîêóñå ãåíûå ñåãìåíòû îðãàíèçîâàíû â êëàñòåðû, èìåþùèå ïî îäíîìó V, J è C ãåííîìó ñåãìåíòó (ðèñ. 4). Òàêèõ êëàñòåðîâ ñîäåðæèòñÿ íåñêîëüêî äåñÿòêîâ èëè äàæå ñîòåí â îäíîì ëîêóñå íà ðàññòîÿíèè 12-15 òïí äðóã îò äðóãà (Rast et al., 1994).

          Ãåíû ïåðâîãî òèïà íàéäåíû ó ðàçíîçóáîé àêóëû (Heterodontus francisci) (Shamblott and Litman, 1989) è ìàëîãî ñêàòà (Raja erinacea) (Anderson et al., 1995). Ó àêóëû êëàñòåðû èìåþò ðàçìåð 3-6 òïí. V è J, J è C ãåííûå ñåãìåíòû ðàçäåëåíû ïðèìåðíî 0,5 è 4 òïí ñîîòâåòñòâåííî. Ó ñêàòà V è J ñåãìåíòû ñëèòû â çàðîäûøåâîé ÄÍÊ.

          Ãåíû âòîðîãî òèïà îáíàðóæåíû ó ïÿòíèñòîé õèìåðû (Hydrolagus colliei) (Maisey, 1984), ïåñ÷àíîé àêóëû (Carcharhinus plumbeus) (Hohman et al., 1992; Hohman et al., 1993), ðàçíîçóáîé àêóëû è ìàëîãî ñêàòà (Ó âñåõ èçó÷åííûõ âèäîâ â êëàñòåðàõ ýòîãî òèïà V è J ãåííûå ñåãìåíòû ñîåäèíåíû óæå â çàðîäûøåâîì ãåíîìå. V è C ãeííûå ñåãìåíòû ðàçäåëåíû 2-3 òïí.

          Ðèñ. 4. Ñõåìà ñòðîåíèÿ ëîêóñîâ ãåíîâ L-öåïåé ÈÃ ó àêóëû.

          Îðãàíèçàöèÿ ãåíîâ ó àêóëû èìååò êëàñòåðíûé òèï. Êàæäûé êëàñòåð èìååò ðàçìåð 3 - 6 òïí è ñîäåðæèò ïî îäíîìó VL, JL è CL ãåííîìó ñåãìåíòó.

          Îáíàðóæåíî òðè òèïà ãåíîâ L-öåïåé ÈÃ. Ëîêóñû ãåíîâ ïåðâîãî è òðåòüåãî òèïîâ èìåþò ñõîæóþ îðãàíèçàöèþ.  ýòîì ñëó÷àå VL è JL, JL è CL ñåãìåíòû ðàçäåëåíû ïðèìåðíî 0,5 è 4 òïí ñîîòâåòñòâåííî (À) (Rast et al., 1994).

          Â ëîêóñå ãåíîâ âòîðîãî òèïà VL è JL ñåãìåíòû ñîåäèíåíû óæå â çàðîäûøåâîì ãåíîìå (Á).

          Òðåòèé òèï ãåíîâ L-öåïåé íàéäåí ó àêóëû-íÿíüêè (Gynglimostoma cirratum) (Greenberg et al., 1993) è ðàçíîçóáîé àêóëû (Rast et al., 1994).  êëàñòåðàõ ýòîãî òèïà V è J, J è C ãåííûå ñåãìåíòû ðàçäåëåíû, êàê è â êëàñòåðàõ ïåðâîãî òèïà, ïðèìåðíî 0,5 è 4 òïí ñîîòâåòñòâåííî. V è J ãåííûå ñåãìåíòû ôëàíêèðóþòñÿ ñàéòàìè ñïåöèôè÷åñêîé ðåêîìáèíàöèè ñî ñïåéñåðàìè 12 è 23 ïí, ÷òî ñîîòâåòñòâóåò êîíôèãóðàöèè ñïåéñåðîâ â ëîêóñàõ êàïïà òèïà ìëåêîïèòàþùèõ. Ïî ïåðâè÷íîé ñòðóêòóðå ãåíû òðåòüåãî òèïà òîæå íàèáîëåå áëèçêè ê ãåíàì êàïïà òèïà âûñøèõ ïîçâîíî÷íûõ (ãîìîëîãèÿ ïî àìèíîêèñëîòíîé ïîñëåäîâàòåëüíîñòè ñîñòàâëÿåò îêîëî 60%).

          Ãåíû ýòèõ òðåõ òèïîâ èìåþò ìåæäó ñîáîé íèçêóþ ñòåïåíü ãîìîëîãèè:40-50% ïî íóêëåîòèäíîé ïîñëåäîâàòåëüíîñòè Ñ ñåãìåíòîâ è 50-60% ïî ïîñëåäîâàòåëüíîñòè V ñåãìåíòîâ (Hohman et al., 1993).

          Ïîëó÷åííûå äàííûå ïîêàçûâàþò, ÷òî ó õðÿùåâûõ ðûá èìååòñÿ î÷åíü áîëüøîå êîëè÷åñòâî ãåííûõ ñåãìåíòîâ. Îäíàêî ñïåöèôèêà îðãàíèçàöèè ãåíîâ èñêëþ÷àåò êîìáèíàòèâíîå ñî÷åòàíèå ñåãìåíòîâ. Âñå ðàçíîîáðàçèå àíòèòåë ó õðÿùåâûõ ðûá ôîðìèðóåòñÿ òîëüêî çà ñ÷åò ýêñïðåññèè áîëüøîãî êîëè÷åñòâà êëàñòåðîâ.

          Äàííûå î íóêëåîòèäíûõ ïîñëåäîâàòåëüíîñòÿõ èç ðàçíûõ ëîêóñîâ âûÿâèëè íèçêóþ ãåòåðîãåííîñòü ãåíîâ (85-95%), ÷òî óêàçûâàåò íà îòñóòñòâèå ñîìàòè÷åñêîãî ìóòàãåíåçà (Rast et al., 1994).

Страницы: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17