Клонирование и анализ генов легких цепей иммуноглобулинов стерляди

           ïðîöåññå ðàçâèòèÿ Â-ëèìôîöèòà â êðîâåòâîðíûõ îðãàíàõ  îäèí èç V ñåãìåíòîâ ñîåäèíÿåòñÿ ñ îäíèì èç J ñåãìåíòîâ ïîñðåäñòâîì ñàéòñïåöèôè÷åñêîé ðåêîìáèíàöèè (Schatz et al., 1992).  ýòîò ïðîöåññ âîâëåêàþòñÿ ñïåöèàëüíûå îëèãîìåðíûå ïîñëåäîâàòåëüíîñòè: ãåïòà- è íîíàìåðû, ôëàíêèðóþùèå ñ 3' ñòîðîíû V ñåãìåíò è ñ 5' ñòîðîíû J ñåãìåíò (ðèñ. 3) (Aguilera et al., 1987; Hesse et al., 1989). Îòëè÷èòåëüíîé îñîáåííîñòüþ ëÿìáäà è êàïïà ëîêóñîâ ÿâëÿåòñÿ êîíôèãóðàöèÿ ïðîìåæóòêîâ ìåæäó ãåïòà- è íîíàìåðàìè, íàçûâàåìûõ ñïåéñåðàìè. Ñ V è J ãåííûìè ñåãìåíòàìè ëÿìáäà òèïà àññîöèèðîâàíû 23 ïí è 12 ïí ñïåéñåðû ñîîòâåòñòâåííî, à ñ V è J ñåãìåíòàìè êàïïà òèïà - 12 ïí è 23 ïí ñïåéñåðû (Durdik et al., 1984; Stavnezer et al., 1985).

ë

          Ðèñ. 2. Ñõåìà ñòðîåíèÿ ëÿìáäà è êàïïà ëîêóñîâ ãåíîâ L-öåïåé Èà ÷åëîâåêà.

          Ëÿìáäà ëîêóñ ñîäåðæèò ìíîãî Vl ñåãìåíòîâ è ñåìü ïàð áëèçêîðàñïîëîæåííûõ Jl-Cl. Òðè èç íèõ ÿëÿþñÿ ïñåâäîãåíàìè (Y). Êàïïà ëîêóñ ñîäåðæèò ìíîãî Vk ïÿòü Jk è îäèí Ck ãåííûé ñåãìåíò (Hieter et al., 1981; Roitt et al., 1993).

          Îáîçíà÷åíèÿ:    - ñèãíàëüíûå îëèãîìåðû.

          Ðèñ. 3. Ñõåìà ðàñïîëîæåíèÿ îëèãîíóêëåîòèäíûõ ïîñëåäîâàòåëüíîñòåé, çàäåéñòâîâàííûõ â ñàéòñïåöèôè÷åñêîé ðåêîìáèíàöèè â êàïïà ëîêóñå ìëåêîïèòàþùèõ. Ýòè ïîñëåäîâàòåëüíîñòè ôëàíêèðóþò ñ 3‘ ñòîðîíû VL ñåãìåíò è ñ 5’ ñòîðîíû JL ñåãìåíò. Âî âðåìÿ ðåêîìáèíàöèè ãåïòàìåð è íîíàìåð îäíîãî èç VL ñåãìåíòà îáúåäèíÿþòñÿ ñ ãåïòàìåðîì è íîíàìåðîì îäíîãî èç JL ñåãìåíòà. Ýòî äåëàåò âîçìîæíûì ñîåäèíåíèå VL è JL ñåãìåíòîâ áåç íàðóøåíèÿ ðàìêè òðàíñëÿöèè (Aguilera et al., 1987; Hesse et al., 1989).

          Îáîçíà÷åíèÿ:    - ñèãíàëüíûå îëèãîìåðû.

          Ïîñëåäîâàòåëüíîñòü, â êîòîðîé ðåêîìáèíèðóþò ëîêóñû L-öåïåé, ñòðîãî óïîðÿäî÷åíà âî âðåìåíè. Ïîêàçàíî, ÷òî ïåðâûìè ïåðåñòðàèâàþòñÿ ëîêóñû êàïïà òèïà, ïðè÷åì åñëè â îäíîé õðîìîñîìå ïåðåñòðîéêà îêàçàëàñü íåôóíêöèîíàëüíîé, òîåñòü íå ïðèâåëà ê ïîÿâëåíèþ ïîëíîöåííîãî ãåíà, òî ðåêîìáèíàöèÿ ïðîèñõîäèò â êàïïà ëîêóñå íà ãîìîëîãè÷íîé õðîìîñîìå.  ñëó÷àå ïîâòîðíîé àáîðòèâíîé ïåðåñòðîéêè àíàëîãè÷íî ïðîèñõîäÿò ïåðåñòðîéêè â ëÿìáäà ëîêóñàõ. Åñëè â êëåòêå íåïðîäóêòèâíî ïåðåñòðîèëèñü âñå ÷åòûðå ëîêóñà, òî îíà ïðåâðàùàòñÿ â 0-êëåòêó è ïîäâåðãàåòñÿ àïîïòîçó. Åñëè æå ïåðåñòðîéêà îäíîãî èç ëîêóñîâ ïðèâåëà ê îáðàçîâàíèþ ôóíêöèîíàëüíîãî ãåíà, òî ðåêîìáèíàöèÿ îñòàëüíûõ ëîêóñîâ áëîêèðóåòñÿ. Äåòàëè ìåõàíèçìà áëîêèðîâàíèÿ íåèçâåñòíû, îäíàêî óñòàíîâëåíî, ÷òî íåîáõîäèìûì óñëîâèåì äëÿ íåãî ÿâëÿåòñÿ òðàíñêðèïöèÿ ïðîäóêòèâíî ïåðåñòðîåííîãî ãåíà.  ðåçóëüòàòå â êàæäîì èíäèâèäóàëüíîì ëèìôîöèòå ñèíòåçèðóåòñÿ òîëüêî îäèí òèï L-öåïåé, êàïïà èëè ëÿìáäà, è ýêñïðåññèÿ ãåíà ïðîèñõîäèò òîëüêî íà îäíîé èç äâóõ ãîìîëîãè÷íûõ õðîìîñîì. Ýòè ôåíîìåíû, íàçûâàåìûå èçîòèïè÷åñêèì è àëëåëüíûì èñêëþ÷åíèÿìè ëåæàò â îñíîâå êëþ÷åâîãî ïðèíöèïà ôóíêöèîíèðîâàíèÿ èììóííîé ñèñòåìû - ïðèíöèïà êëîíàëüíîé ñåëåêöèè (Ïîë, 1987; Strob, 1987).

           îðãàíèçìå ìëåêîïèòàþùèõ ãåíåðèðóåòñÿ ñâûøå äåñÿòè ìèëëèîíîâ âàðèàíòîâ àíòèòåë, õîòÿ â ãåíîìå ñîäåðæèòñÿ çíà÷èòåëüíî ìåíüøåå êîëè÷åñòâî ãåííûõ ñåãìåíòîâ, êîòîðûå ìîãóò ó÷àñòâîâàòü â ôîðìèðîâàíèè âàðèàáåëüíûõ äîìåíîâ.  ñëó÷àå L-öåïåé, îñíîâíûì èñòî÷íèêîì ðàçíîîáðàçèÿ ÿâëÿåòñÿ êîìáèíàòèâíîå ñî÷åòàíèå V è J ñåãìåíòîâ. Äîïîëíèòåëüíûì èñòî÷íèêîì ÿâëÿåòñÿ ñìåùåíèå ðåêîìáèíàöèîííîé ðàìêè â ìåñòå èõ ñîåäèíåíèÿ. Êðîìå òîãî, V ãåííûå ñåãìåíòû ìîãóò îáìåíèâàòüñÿ ó÷àñòêàìè ÄÍÊ ñ ïñåâäîãåíàìè ïîñðåäñòâîì ãåííîé êîíâåðñèè. Î÷åíü ñóùåñòâåííûé âêëàä â ðàçíîîáðàçèå ñïåöèôè÷íîñòåé àíòèòåë âíîñèò ñîìàòè÷åñêîå ìóòèðîâàíèå âàðèàáåëüíûõ ãåííûõ ñåãìåíòîâ â ñàéòàõ, ó÷àñòâóþùèõ â ôîðìèðîâàíèè àíòèãåíñâÿçûâàþùåãî öåíòðà. Ñîìàòè÷åñêîå ðàçíîîáðàçèå ãåíåðèðóåòñÿ ïðè âòîðè÷íîì èììóííîì îòâåòå ïóòåì âêëþ÷åíèÿ ãèïåðìóòàöèîííîãî ìåõàíèçìà â êëåòêàõ ïàìÿòè â çàðîäûøåâûõ öåíòðàõ ëèìôàòè÷åñêèõ óçëîâ (Tonegawa 1983; Roitt et al., 1993).

Страницы: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17